Aβ诱导：当脑内Aβ的生成率高于清除率时，过多Aβ在脑内沉积，从而诱发神经毒性。同时，Aβ 还能造成线粒体产能障碍，引起线粒体自噬、突触丢失和细胞死亡，进而加快AD的进程。Aβ诱导AD模型一般通过在实验动物脑内海马体、侧脑室等部位注入Aβ片段获得。

截至目前，斑马鱼内源性Aβ还未被发现，其体内 APP 的处理过程是否与人类相似尚不明确，但对野生型和转基因斑马鱼进行Aβ功能和毒性分析是可能的。现多将Aβ直接加入斑马鱼幼鱼的养殖水中进行造模，或将斑马鱼麻醉后直接向侧脑室注射Aβ蛋白。2022年，Prabesh Bhattarai等通过脑室显微注射将Aβ42注射到成年斑马鱼大脑中，在斑马鱼中建立了急性淀粉样变性模型，通过电镜观察，该模型显示出与人脑相似的淀粉样蛋白聚集、小胶质细胞激活和炎症反应、突触变性、神经元细胞死亡和学习记忆缺陷。该研究还发现，在斑马鱼中发现的再生相关分子程序可以诱导类似人脑的体外3D培养系统的神经源性输出，这表明这些分子程序可能是AD药物发现干预策略的潜在目标。

图2 Aβ42诱导斑马鱼AD模型在疾病机制研究、早期药物开发和临床前研究中的应用

氯化铝诱导：维持大脑正常认知功能离不开金属离子稳态，金属离子稳态失衡是神经退行性疾病发生的关键因素之一。铝(Aluminum，A1)、铜、锂、锌、铅、二氧化硅、氟化物、汞和铁都会引起神经毒性。

有研究发现，用氯化铝浸泡斑马鱼96h可表现出明显的AD样行为。此外2020年，顾晓群等，用六水合氯化铝配制成100 μg/mL的染毒液，持续浸泡斑马鱼30d，每日更换一半染毒液，可见斑马鱼端脑神经细胞数量明显减少，脑组织Aβ生成相关 appb、bace1、aph1 基因表达明显增高。该研究证明了补肾益智方能够有效地改善AD斑马鱼的学习记忆能力，减少Aβ生成，减轻氧化应激反应，改善AD内环境，从而达到改善AD症状的作用。目前氯化铝诱导的斑马鱼AD模型使用较为广泛。

冈田酸(okadaic acid，OA)诱导：OA是分布最广泛的海洋毒素之一，极易在贝类和部分鱼类中积累，被人类食用后引起食物中毒。OA 本身是多种丝氨酸/苏氨酸磷酸酯酶抑制剂，使用后可引起全身磷酸酯酶的升高，使磷Tau蛋白在脑内大量堆积，常用于制作体外Tau 蛋白过磷酸化的AD模型。2018年，Daniel Koehler等通过给斑马鱼施用冈田酸建立了AD模型。对一种新型药物——硫代氨酸氯胺酮-5-乙酯进行了药效试验，并阐明了其作用机制。使用OA诱导斑马鱼AD模型操作便捷且较为有效。

目前确定的AD相关基因有APP基因、早老素1(presenilin-1，PSEN-1)基因、早老素2(presenilin-2，PSEN-2)基因等，其致病的主要机制为影响 APP的正常代谢而导致患者脑内 Aβ1-42 的堆积。基因编辑技术的出现，扩大了利用斑马鱼模型对AD的病理、分子机制和药物靶点的研究。

图3 家族性AD(FAD)中人类基因突变的斑马鱼同源物

图4 斑马鱼基因编辑技术及其在AD病因研究中的应用

APP转基因斑马鱼AD模型：斑马鱼有2个APP的同源基因，分别为APPa和APPb。斑马鱼APPa类似于人类 APP770 亚型，是人类 APP 的直系同源物，与aplp2一样都是Aβ前体蛋白家族成员。而APPb类似于人类 APP695 亚型，敲除该基因后可导致家族性 AD，不仅可能参与AD的发病机制，且可能影响AD前的发育。有实验通过向斑马鱼插入人APP瑞典型突变基因(APPsw)制作斑马鱼AD模型，在12月龄时可见线粒体缺失、神经元数量减少、Aβ 沉积等病理现象。有研究A152T-tau 的转基因斑马鱼模型，可见明显的发育障碍和运动缺陷。还有研究发现 UCP2、Δ133p53等基因也可影响AD的发病进程。目前，使用较多的仍为AD相关的双转基因或多转基因小鼠模型。

PSEN1转基因斑马鱼AD模型：PSEN1 被认为是一个家族性AD相关的基因，该基因的突变会影响 γ-分泌酶对APP的切割和Aβ的产生，进而参与AD的进程。有实验采用删除2个密码子的方式导致斑马鱼 PSEN1 基因突变，诱导斑马鱼早发性家族性AD病变模型，可见斑马鱼脑中出现ATP合成障碍及溶酶体功能紊乱。

PSEN2转基因斑马鱼AD模型：PSEN2也是目前已知的导致家族性AD的致病基因之一，但该基因的突变概率较低，目前相关研究也较少。有研究利用MO抑制斑马鱼胚胎PSEN2基因制作AD模型，可见 γ-分泌酶活性降低及严重的发育缺陷和神经元丢失，并通过 p53 途径诱导细胞凋亡。也有研究利用同样的方法制作了相关模型，发现PSEN2活性的降低会明显减弱斑马鱼胚胎的Notch 信号并导致神经发育紊乱。