题目：TLR7/8 agonist 3M-052 formulated in micelles induces local type I IFN response and antiviral immunity in zebrafish larvae

原文链接：https://dx.doi.org/10.3389/fimmu.2026.1834678

期刊：frontiers in Immunology

摘要

引言：基于胶束的递送系统通过包封活性化合物并实现靶向递送，为疫苗佐剂提供了极具潜力的平台，从而可降低全身性副作用。本研究以斑马鱼（斑马鱼属）幼鱼为模型，探究了负载Toll样受体7/8激动剂3M-052的胶束所引发的免疫应答、体内分布及抗病毒效果。

方法：向转基因报告基因斑马鱼幼虫注射荧光标记的胶束，通过活细胞共聚焦显微镜监测胶束以及中性粒细胞、巨噬细胞或 MxA 表达的定位。还通过实时定量聚合酶链式反应在全身水平评估宿主反应。此外，用重组辛德比斯病毒感染幼虫，以监测病毒感染的定位。

结果：胶束显示出从注射部位的逐步清除，并促进中性粒细胞和巨噬细胞的局部募集，这表明免疫被激活。全幼虫分析显示，未负载或负载3M-052的胶束注射后，关键免疫基因无显著上调。然而，3M-052胶束触发了短暂且局部的mxa反应，证实诱导了局部I型干扰素反应。此外，斑马鱼幼虫在3M-052胶束注射部位附近的病毒复制显著减少。

讨论：这些研究结果表明，胶束能够有效递送3M-052，并引发局部抗病毒反应，而不会产生广泛的全身免疫激活。

关键词 3M-052、固有免疫、巨噬细胞、胶束、中性粒细胞、TLR7/8 激动剂、斑马鱼、I 型干扰素

引言

理解佐剂如何塑造免疫反应仍是疫苗开发中的一项关键挑战。传统模型依赖终点分析，限制了捕捉免疫动态激活过程的能力。斑马鱼（斑马属）凭借其透明的幼体以及荧光报告品系的可获得性，为实时先天免疫监测提供了独特模型，可通过实时时空分析直观呈现免疫激活过程。尽管斑马鱼已广泛应用于发育生物学和毒理学研究，但随着新型佐剂和疫苗平台的需求因新发传染病而增加，其在疫苗研究中的应用仍未得到充分开发。斑马鱼具有遗传可操作性，且关键免疫通路高度保守，包括Toll样受体（TLR）介导的信号传导和I型干扰素（IFN）反应，使其特别适用于佐剂作用机制的研究。斑马鱼幼体在该阶段不具备适应性免疫反应，因此可用于直接监测先天免疫系统对胶束和佐剂的反应。

胶束是自组装的两亲共聚物纳米颗粒，为靶向性免疫调节提供了一种有前景的策略。与依赖全身免疫激活的传统佐剂不同，胶束能够精准递送免疫刺激分子或疫苗，提高生物利用度和细胞摄取效率。重要的是，胶束并非被动载体；其自身可通过抗原呈递细胞的摄取增强，促进树突状细胞活化与抗原呈递，从而激发免疫激活，这使其具备了固有的类佐剂特性。当胶束负载免疫刺激配体时，其作用机制为复合佐剂系统，而非简单的递送平台——载体与所载物质均可参与免疫激活。在此结构下，胶束与结合的配体可协同作用，增强固有免疫应答的强度与空间调控能力。此外，胶束是追踪生物分布的多功能平台，其可将所载物质包封于疏水核心中，同时实现荧光团与亲水表面或核心本身的偶联。佐剂的包封还能减少过早的免疫激活，确保免疫应答更具局部性与可控性。然而，胶束在鱼类佐剂应用方面的潜力仍未被探索。

在免疫刺激分子中，TLR7/8激动剂（如3M-052）已成为基于I型干扰素的抗病毒免疫的强效激活剂。内体模式识别受体TLR7和TLR8的天然配体是单链RNA及其降解产物。它们的激活启动MyD88依赖性信号级联反应，进而诱导I型干扰素产生并促炎细胞因子释放。TLR7/8的人工配体种类繁多，包括碱基衍生物以及双环或三环化合物。首个合成激动剂是咪喹莫特和瑞喹莫德，这两种咪唑并喹啉类化合物已得到广泛研究，并推动了一系列相关药物的研发靶向TLR7/8的激动剂与拮抗剂的作用谱。在哺乳动物体内，这类化合物已展现出作为传染病和癌症免疫疗法疫苗佐剂的潜力。

3M-052（又称特拉托利莫德）是一种脂质修饰的咪唑并喹啉类化合物，具有免疫刺激、抗病毒和抗肿瘤活性。它可在组织或肿瘤中形成组织沉积并实现持续缓慢释放，在小鼠体内可诱导局部TLR7/8激活活性，且不会引发全身性细胞因子反应。研究表明，3M-052在多种场景下的哺乳动物临床前疫苗研究中均能触发强效的免疫刺激活性。在新生恒河猴实验中，与3M-052（0.1毫克/千克）配伍的13价肺炎球菌结合疫苗（PCV13）诱导产生的肺炎球菌多糖特异性IgG抗体滴度，是单独使用PCV13时的最高达100倍。在HIV-1免疫研究中，3M-052诱导出针对HIV-1包膜蛋白的持久抗体反应，使36%的骨髓驻留浆细胞为HIV-1特异性，且该特异性可被检测到长达一年。一种针对SARS-COV2的受体结合域-分选酶A结合铁蛋白纳米颗粒疫苗，在与3M-052-明矾佐剂联用时，其诱导的抗体反应得到增强，且对SARS-COV2变异株展现出更广泛的保护作用。另有研究以3M-052为佐剂、H1N1A/波多黎各/8/34株重组血凝素为疫苗，结果显示该组合诱导出强烈的Th1型免疫反应和高水平中和抗体，且未引发肿瘤坏死因子α等促炎细胞因子的全身性诱导。3M-052强效的Th1刺激特性在HIV-1和利什曼病疫苗研究中也得到了证实，凸显了其作为佐剂的潜力。除佐剂特性外，3M-052还可通过重塑肿瘤微环境发挥抗肿瘤活性，其机制可能与干扰素介导的途径有关。研究发现，3M-052注射后可增加M1型巨噬细胞的募集，并促使CCL2趋化因子向注射部位聚集。尽管其全身性抗肿瘤效果在不同模型中表现不一，但有研究报道，即使局部给药甚至在远离肿瘤部位给药，3M-052仍能降低黑色素瘤的肿瘤负荷。

鉴于I型干扰素诱导佐剂在鱼类疫苗中已被证实具有功效，基于胶束的3M-052递送技术为提升水生动物的免疫反应提供了一种全新方法。本研究中，我们评估了包裹TLR7/8激动剂3M-052的胶束，旨在探究其在非哺乳类脊椎动物模型体内的免疫刺激效果与生物分布。我们利用斑马鱼中荧光标记的胶束以及免疫细胞报告基因系，追踪了胶束的清除过程，并对局部免疫细胞的募集动态进行了特征分析。通过这些分析，我们验证了基于胶束的递送方式能否在不引发广泛全身激活的情况下，触发先天免疫反应。该研究为探索水生动物靶向佐剂策略提供了极具价值的研究框架，同时也凸显了斑马鱼作为实时免疫学评估模型的实用价值。

结果

胶束在斑马鱼幼虫体内的生物分布

为评估胶束的生物分布，在受精后3天（3dpf）的斑马鱼幼鱼尾部肌肉中肌内注射荧光标记的胶束，并评估注射位点的扩散情况（图1A）。为降低黄色素细胞色素导致的绿色自发荧光背景，本实验在slc2a11b基因敲低斑马鱼中进行（补充图1）。选择肌内注射是为了模拟鱼类中标准的疫苗接种方案。通过活体宽场荧光成像追踪注射后48小时内胶束的生物分布。为量化注射位点附近的胶束，选取以注射点为中心、宽度为100微米的正方形区域。尾部荧光成像显示注射位点的Bodipy信号呈渐进性降低（图1B）。注射后6小时（hpi），Bodipy荧光显著高于注射PBS-BSA的对照组（图1C）。注射后24小时，注射位点内的荧光有所下降，但仍显著高于注射PBS-BSA的对照组。图1B右侧面板展示了通过活体共聚焦显微镜在注射位点拍摄的Z-stack最大投影图，清晰显示Bodipy信号部分扩散至注射位点外。注射后48小时，注射胶束的斑马鱼与注射PBS-BSA的斑马鱼之间的Bodipy信号无显著差异。同样，在Z-stack最大投影图中，48小时时呈现Bodipy信号的颗粒数量明显减少。荧光的这种降低以及Bodipy信号的部分扩散，可能归因于免疫细胞的活性，尤其是巨噬细胞和中性粒细胞，已知这些细胞会吞噬并降解注射位点的外来颗粒。免疫介导的清除可解释Bodipy信号随时间的渐进性下降，因为这些细胞可能同时参与胶束的降解与扩散。

图1 胶束的生物分布。(A) 实验设计示意图。(B) 注射后48小时内胶束的生物分布。向Slc2a11b CRISPant AB斑马鱼注射胶束（0.08% 博迪皮，绿色），并在注射后6、24和48小时评估其分布。左列和中列：宽场成像，透射光与绿色荧光的合并图像。右列：共聚焦成像，肌肉的Z轴堆叠图像，未覆盖带有主要色素细胞的背侧和腹侧中线，仅显示绿色荧光。每组11条幼鱼的代表性图像。(C) 柱状图展示了以平均值±标准误（SEM）量化的注射部位（SOI，白色虚线框）内博迪皮信号，以各时间点注射部位总面积的百分比表示（((n=10))）。统计学显著性由(*P<0.05)、(**P<0.01)和(P<0.0001)表示

为探究巨噬细胞在注射部位胶束清除过程中的潜在作用，我们采用了巨噬细胞报告品系tg(mpeg1:gal4; UAS:nfsB-mCherry)（图2A）。通过共聚焦显微镜定量注射部位的mCherry信号，对巨噬细胞的募集情况进行评估（图2B）。注射含3M-052胶束的斑马鱼在注射后24小时和48小时，其mCherry表达量显著高于注射PBS-BSA的斑马鱼（图2C）。注射后24小时，与注射对照胶束的斑马鱼相比，注射含3M-052胶束的斑马鱼mCherry表达量显著更高，这表明该佐剂具有募集巨噬细胞的作用。此外，共聚焦成像结果（图2D）证实巨噬细胞可内化含3M-052的胶束（视频S1）。

图2 巨噬细胞向注射部位的募集及对胶束的吞噬作用。(A) 实验设计示意图。(B) 对Tg(mpeg1:gal4; UAS: nfsB-mCherry)斑马鱼幼虫肌肉内注射1纳升的PBS-牛血清白蛋白、胶束（0.08% 硼二吡咯烷）或负载3M-052的胶束（0.02% 硼二吡咯烷）。在注射后24小时和48小时，评估巨噬细胞（品红色）向注射部位的募集情况。每组10条成像的斑马鱼幼虫的代表性图像。(C) 柱状图显示不同时间点斑马鱼注射部位（白色虚线框）内mCherry（巨噬细胞）信号的平均灰度值，单位为任意单位（au）。柱状图展示平均值±标准误（每组n=(in=8)）。统计学显著性以(++ P<0.01)和*** (P<0.001)表示。(D) 共聚焦Z-stack的正交投影图，显示注射后24小时，巨噬细胞（品红色）吞噬负载3M-052的胶束（绿色）的情况。

为评估局部中性粒细胞对负载3M-052胶束的反应，使用了tg(lyz:nsfb-mCherry)（30）中性粒细胞报告系采用了该方法（图3A）。已知中性粒细胞会被快速募集至感染部位以清除入侵的病原体，因此为了捕捉中性粒细胞在注射部位的早期募集和持续存在，成像时间点相较于巨噬细胞更聚焦于短期时间点，即感染后4小时和24小时（hpi）。如前所述对斑马鱼幼虫进行肌肉内（IM）注射。在感染后4小时，3M-052组的mCherry荧光强度相较于牛血清白蛋白（BSA）对照组显著升高。在感染后24小时，这一增强的信号依然持续存在，与空白胶束组和牛血清白蛋白对照组相比，注射了负载3M-052胶束的斑马鱼注射部位仍观察到显著更高的mCherry荧光强度。在两个时间点，牛血清白蛋白组与空白胶束组之间均未观察到差异（图3B）。

图3的显著性由(*P<0.05)、(**P<0.01)和****P<0.0001表示，单位为任意单位（au），对应不同时间点斑马鱼注射部位（白色虚线框）。柱状图显示每组的平均值+标准误均值（((n = 15)）。统计值为小时后（hpi）。每组7至9条成像的幼鱼代表图像。(B) 柱状图显示mCherry（中性粒细胞）信号的平均灰度值以任意单位表示。注射部位的中性粒细胞募集（品红色）在4小时和24小时进行评估。中性粒细胞向注射部位的募集。(A) Tg(Lyz: mCherry)幼鱼肌肉内注射1纳升含0.08%博维比（Bodipy）的胶束、或载有3M-052（0.08%博维比）的胶束（绿色）以及PBS-牛血清白蛋白（BSA）。

尽管招募效果良好，但我们未观察到中性粒细胞摄取胶束的阳性证据。在3M-052组附近常能检测到中性粒细胞，但荧光显微镜未发现明确的共定位现象与细胞内摄取一致。这些发现表明，在本实验条件下，中性粒细胞主要因3M-052的作用被招募至注射部位，可能参与局部炎症信号传导，而非作为胶束摄取的主要吞噬细胞。

综合这些数据表明，通过胶束递送的3M-052能在注射部位引发持续的巨噬细胞和中性粒细胞趋化反应，这与3M-052能驱动局部先天免疫活性的观点相符。

AB株和myd88突变型斑马鱼中ISG基因对胶束及含3M-052胶束的表达响应有限

为评估对胶束以及负载3M-052的胶束的免疫反应，我们通过实时荧光定量PCR（qPCR）在斑马鱼幼鱼全样本中，于感染后24小时和48小时（hpi）定量了五个免疫相关基因的表达，包括两个干扰素刺激基因（ISGs）——mxa和isg15、两种I型干扰素——ifnphi1（分泌型异构体）和ifnphi3，以及促炎细胞因子tnfa（图4）。由于3M-052可触发需要Myd88衔接蛋白的TLR7/8反应，我们对比了野生型（AB）和myd88基因敲除（myd88-/-）的幼鱼（31）。我们还注射了重组斑马鱼IFNj1（rIFNj1）作为阳性对照。在AB型斑马鱼中，尽管rIFNj1如预期般诱导了强烈的ISG反应，但负载3M-052的胶束并未使任何检测基因的表达出现显著变化，这表明无论是在野生型还是myd88基因敲除型斑马鱼中，此类胶束均不会诱导强烈的全身性免疫反应。值得注意的是，在myd88缺陷型幼鱼中，观察到了对rIFNj1反应的一些差异，例如ifnphi3的诱导速度更快，这提示在I型干扰素下游的反应中存在一条Myd88依赖性负反馈环路。总体而言，该分析表明，肌肉注射（IM）负载3M-052的胶束不会引发明显的全身性反应。

图4 对胶束反应的全身体外定量逆转录聚合酶链反应分析未显示出系统性反应。在不同制剂处理后24和48小时，对AB型或myd88突变型斑马鱼中mxa、isg15、ifnphi1（分泌型）、ifnphi3和tnfa基因表达进行qPCR分析。Y轴代表相对于PBS-牛血清白蛋白对照组的基因表达倍数变化（对数刻度）。数据以带标准误均值的形式呈现。每个样本在RNA提取前合并3条斑马鱼，每组(n=9)个样本。统计学显著性由* (P<0.05)、北* (P<0.01)、大全 (P<0.001)和**** (P<0.0001)表示

负载3M-052的胶粒引发局部ISG反应

为评估 3M-052 的局部免疫刺激作用，本研究使用了特征化的 ISG 报告基因系 tg(mxa:mCherry)（图5A）。研究人员使用了tg(mxa:mCherry)报告基因品系，因为该品系能够响应I型干扰素，而I型干扰素预计会在TLR7/8信号通路下游被诱导产生，这使其成为补充基因表达数据的有用工具。注射后2天，负载3M-052的胶束在注射位点诱导mxa启动子驱动的荧光显著增强，与PBS组相比，这表明干扰素反应被强烈但短暂地激活。对照组（图5B）。同样，rIFNj1 作为阳性对照，在两个时间点均能强烈诱导 mxa 报告基因的表达。相比之下，在感染后24小时或48小时，对照胶束组与磷酸盐缓冲盐水（PBS）注射组的结果无显著差异。仅注射胶束的斑马鱼中，mxa 的诱导水平始终低于注射含3M-052胶束的斑马鱼，尽管这种差异不显著，这表明3M-052是主要的诱导因子这是免疫激活所致，而非胶束制剂本身（图5C）。负载3M-052的胶束注射部位附近表达mxa的细胞形态表明其为巨噬细胞（图5B；白色箭头）。在距注射点仅200微米的远端肠道上皮细胞（图5B；红色箭头）和远端前肾小管（图5B；蓝色箭头）中也观察到了转基因表达，这些组织是对重组干扰素-j1（rIFNj1）反应最强烈的组织。

图5 注射负载3M-052的胶束后mxa表达的局部上调。(A) 实验示意图。(B) 共聚焦成像显示在不同时间点注射PBS-BSA、胶束（0.08 硼二吡咯烷）、胶束（3M-052 + 0.02 硼二吡咯烷）或重组IFNj1后mxa（品红色）的表达情况。疑似巨噬细胞（根据形态）= 白色箭头，肠道远端 = 红色箭头，前肾小管远端 = 蓝色箭头。每组分别对6条（PBS组、IFN组）、8条（胶束组）或13条（胶束+3M-052组）成像的斑马鱼幼鱼拍摄代表性图像。(C) 柱状图显示斑马鱼幼鱼注射部位mxa诱导的平均灰度值。柱状图表示平均值±标准误均值，样本量n=10。统计学显著性由 大大大 (P<0.001) 和**** (P<0.0001) 标注

含3M-052的胶束在注射部位限制辛德毕斯病毒复制

为评估负载3M-052的胶束对病毒复制的影响，研究人员先向斑马鱼注射负载或未负载3M-052的胶束，或注射重组干扰素φ1作为阳性对照，24小时后在对侧用编码mCherry（品红色）的辛德毕斯病毒（SINV-mCherry）进行攻毒。通过mCherry荧光信号对各组的病毒复制水平进行定量分析。（图6A），我们选择辛德毕斯病毒（SINV）是因为此前已证实，I型干扰素在斑马鱼体内控制辛德毕斯病毒复制的过程中发挥关键作用。对注射部位周围感染区域的定量分析显示，注射IFNj1或负载3M-052胶束的斑马鱼，其病毒复制均出现显著下降（图6B）。该数据证实，3M-052诱导注射部位附近的局部I型干扰素反应具有显著的抗病毒效果。

图6.3M-052给药对辛德毕斯病毒（SINV）复制的影响。（A）感染后1天（dpi）的活体宽场荧光图像，显示SINV复制情况（品红色）。幼虫在感染前1天分别经微胶束、载有3M-052的微胶束、IFNφ1或PBS预注射处理；每组共成像10条幼虫，图中为各组代表性图像。（B）柱状图定量分析SINV复制水平，通过测量整个幼虫及感染部位SINV荧光信号的平均灰度值（任意单位，au）进行评估，时间点为感染后24小时（24 hpi）。柱状图显示均值±标准误（SEM），每组n = 10。统计学显著性以**P < 0.01和***P < 0.001表示。

讨论

本研究评估了负载TLR7/8激动剂3M-052的胶束在斑马鱼中触发的先天抗病毒免疫应答的诱导情况及功效。研究结果表明，尽管单独的胶束仅能引发微弱的免疫激活，3M052负载胶束可在注射部位促进局部干扰素反应和髓系细胞募集。此外，3M-052负载胶束能有效抑制辛德毕斯病毒在注射部位的复制，表明其具有与重组干扰素-λ注射类似的功能性抗病毒效果。然而，我们未观察到明显的全身性干扰素刺激基因的上调，这表明该反应在很大程度上仍如哺乳动物模型中所观察到的那样具有局部性。

我们的研究结果表明，在斑马鱼体内肌内递送3M-052胶束会导致其生物分布受限，主要集中在注射部位周围，部分胶束会被巨噬细胞。对活体斑马鱼中荧光胶束的实时追踪证实，随着时间推移，胶束大部分仍局限于注射部位，部分扩散推测是由于胶束被内化后巨噬细胞迁移至邻近组织所致。 bodipy信号随时间减弱的这种空间限制特征与观察到的免疫细胞动态变化一致，即中性粒细胞在4小时后被快速募集，并在24小时后仍保持较高水平；与此同时，与PBS-BSA组相比，巨噬细胞在注射后24小时和48小时也均持续存在控制。先天免疫细胞的存在与局部聚焦性炎症反应一致，且无全身性激活。

胶束制剂可能通过促进局部滞留并保护佐剂不被降解来促成这一效果，从而实现佐剂的长效释放，并在注射部位持续刺激免疫反应。胶束的缓释机制已在多项研究中得到证实，效果可持续长达两周。在本研究模型中，注射后博迪皮（Bodipy）信号可持续长达48小时，这一结果也佐证了其缓释特性。这种机制能有效增强局部免疫激活，同时最大限度减少脱靶效应或全身暴露。此类递送系统在黏膜环境中可能具有应用价值，因为屏障完整性和酶降解问题会给传统佐剂和疫苗递送系统带来挑战。未来开展对比不同胶束结构和多种佐剂配方的研究，对于判断这种缓释效果是否可行至关重要。该效果是由胶束组成、特定佐剂特性还是两者的共同作用所驱动的。

在辛德毕斯病毒攻击斑马鱼时，负载3M-052的胶束在注射部位诱导干扰素的效果最为显著。负载3M-052的胶束在注射部位诱导了辛德毕斯病毒-樱桃红色荧光蛋白复制的局部减少，这与重组干扰素β1所产生的效果相似。这表明，尽管3M-052递送虽可能不会触发系统性干扰素反应，但能够产生有效的局部抗病毒反应，这强化了胶束制剂TLR激动剂在特异性免疫中的潜力。尽管存在局部免疫激活，但我们在AB型或myd88突变型斑马鱼中均未检测到显著的系统性细胞因子诱导。这与先前的研究结果一致，即3M-052不会诱导系统性反应。多篇研究已证实，TLR7和TLR8均可在斑马鱼发育的幼体阶段表达，最早可至受精后12小时，因此免疫细胞很可能通过TLR7/8识别3M-052，其机制与哺乳动物系统类似。在我们的mxa报告基因系数据中，细胞形态学结果显示巨噬细胞被负载3M-052的胶束激活，这与巨噬细胞吞噬胶束的相关证据相吻合。

未来的研究应探究其他TLR7/8激动剂，因为它们也被证明是佐剂的强效靶点。在斑马鱼中，其他咪唑并喹啉类化合物（如瑞喹莫德（R848））已被证实能在(rag)突变斑马鱼的淋巴细胞样细胞群和巨噬细胞中诱导先天免疫反应，同时还可能通过自然杀伤细胞活化对细菌病原体提供一定保护。在哺乳动物中，研究表明在小鼠体内以纳米颗粒形式递送加德莫德等其他咪唑并喹啉类化合物时，可改善免疫细胞活化、增强淋巴结靶向性并诱导更广泛的免疫反应。将基于加德莫德的制剂与流感或严重急性呼吸综合征冠状病毒2型（SARS-CoV-2）疫苗联合使用时，仍能维持强效的抗体反应。在严重急性呼吸综合征冠状病毒2型（SARS-COV2）疫苗的脂质纳米粒（LNPs）的可电离脂质中掺入咪唑并喹啉类化合物，也证实了这些化合物能够通过辅助性T细胞1（Th1）介导的通路诱导强烈的先天免疫反应，进而产生强效的B细胞和抗体反应。另外，聚合物-纳米粒（PNP）水凝胶等其他递送系统也可能是值得探索的有趣方向。例如，3M-052佐剂化的聚合物-纳米粒水凝胶被证实能增强体液免疫反应的强度、广度和持续时间，同时还能改善小鼠体内的全身性T细胞反应。

虽然本研究主要聚焦于3M-052胶束递送对先天免疫反应的影响，但其对适应性免疫系统的下游效应仍是未来研究的重要方向。巨噬细胞向注射部位的募集提示了抗原呈递细胞活化的潜力，这可能促进适应性免疫反应的启动。在哺乳动物中，TLR7/8激动剂已被证实能促进树突状细胞成熟，并推动Th1型适应性免疫的形成，其特征为细胞毒性T细胞反应以及向IgG2A产生的转变。鉴于斑马鱼和其他硬骨鱼类拥有功能性的适应性免疫系统，3M-052负载胶束或许能类似地增强抗原特异性反应，尤其是通过提升病毒或疫苗抗原的交叉呈递效率。因此，通过3M-052等TLR7/8激动剂实现的靶向IFN诱导，不仅可能触发强烈的局部先天免疫反应，还能为水生动物疫苗诱导的适应性免疫功能提升提供机制层面的支撑。未来研究应进一步探究抗原特异性T细胞和B细胞研究含不同佐剂的胶束制剂疫苗接种后老年鱼的免疫激活情况，以探究这些机制是否与哺乳动物的一致。

本研究的局限性

本研究以斑马鱼幼鱼为实验对象，该阶段的斑马鱼幼鱼尚未发育出完整的适应性免疫系统。因此，募集的抗原呈递细胞（APCs）与全身免疫反应之间的相互作用可能与成年斑马鱼中的情况有所不同。此外，本研究未构建疫苗相关模型，因为未共注射抗原以直接评估佐剂效应。研究也未与非包封型3M-052进行对比，核心目的是评估胶束基递送系统在斑马鱼幼鱼模型中的可行性与性能。